Поставил себе цель получить ризоморфную монокультуру на агаре штамма Psilocybe Cubensis RustyWhyte и поделиться своим опытом.
Это не конечная версия публикации и гайд будет дополняться моими результатами по мере накопления опыта )
SAB (still air box)
Для старта своих микологических экспериментов я собрал SAB + приобрёл дополнительный инвентарь
SAB использую без полотенца, но в качестве меры очистки внутреннего пространства применяю кварцевую лампу 25W с озоном, антисептик ИПС ~70% включительно
Как видно на фото выше САБ стоит на раскладном столике, такой же стул рядом с ним. Набор
бюджетный, легко складывается и убирается в сторону в случае ненадобности.
Рецепт агара и его приготовление
Агар готовил по рецепту:
100 мл воды
2 г порошка агара пищевого
2 г лёгкого солодового экстракта
Для агара подойдёт любая стеклянная банка или пластиковая тара с маркировкой 5PP
После соединения всех ингредиентов взбалтываем их в бутылке.
Далее ставим её в скороварку. Обязательно на подставке, т.к. температура кипения воды не поднимется выше 100°С, именно пар
даёт температуру в 115-120°С при автоклавировании!
Подставка как на фото ниже стоит всего 2-4$, зато благодаря этому предмету вы будете стабильно получать качественный результат.
Расстояние в 5 см от дна скороварки до края подставки используется как резервуар для воды)Как поставили бутылку и налили воды закручиваем винт скороварки и ставим её на максимальный режим нагрева, как только засвистит пар, выходящий через клапан, сразу убавляем мощность нагрева до 40-50% и оставляем стерилизоваться на 40-60 минут.
Как только скороварка сбросит давление мы аккуратно достаём горячую бутылку с агаром.
Используем прихватку-рукавицу или полотенце, банка очень горячая! Перетряхиваем содержимое для равномерного растворения агара. После этого несём его к САБу для охлаждения.
Очень важно дождаться пока агар остынет до такой температуры, когда мы сможем без последствий брать в руки горячую бутылку для разлива агара по чашкам, но в то же время нужно следить, чтобы агар не остыл до слишком низкой температуры, иначе он загустеет в бутылке (работать нужно быстро).Это один из примеров разлитого агара по чашкам петри. На фото ниже - сразу после разлива агар остужается. В моём случае процесс затвердевания занял более 90 минут.
На втором фото ниже - уже затвердевший агар, на который был засеян кусочек агара с ризоморфным мицелием. В таком пластиковом коробе я отправляю его в инкубатор при t 29-30°C.
Ризоморфный мицелий и селекция
Как я сказал выше, на агаре у меня уже есть ризоморфный мицелий. Как я его получил?
На момент написания данного текста эта история практических экспериментов длится примерно месяц. Будет проще, если разделить этап каждого засева чашек петри на T - transfer (перенос), к примеру T0 - нулевой трансфер, т.е. засев агара споровым материалом.
Я использовал данную технику нанесения спорового материала:
Из партии чашек с T0 мицелий визуально был практически полным пухом, но отобрав наиболее перспективные на вид чашки я выбрал и срезал с них участки, отдалённо похожие на ризоморфы. Перенёс их на новую партию чашек петри (это уже T1). Спустя несколько дней после прорастания мицелия мы можем оценить его и на данный момент выбрать наиболее перспективного кандидата.
Например, эта культура мне показалась самой лучшей в плане скорости роста и визуально похожей на гифы:
Данную чашку я выбрал для дальнейших пересадок. Остальные показали результаты гораздо хуже, в следствии чего они были забракованы. Как вы уже догадались, с этой чашки я также срезал наиболее красивые участки, перенеся их на новую партию агара (перенос T2). С данной партии мне удалось получить 2 чашки с визуально мощными ризоморфами:
Для более высокого шанса на закрепление стабильного результата в партии чашек T3 я взял 16 чашек с агаром, на каждую из них высадил по кусочку ризоморфного мицелия из этих двух чашек.
В планах получить ризоморфную монокультуру, как на этом фото: (фото не моё)
После получения такой монокультуры и череды переносов для закрепления результата можно начать гров с засева зерна. После обрастания сделать ТУБ и клонировать с 1-2 волны лучших кандидатов на агар. Несколько раз сделать из этого мицелия трансфер и ризоморфный клон будет готов! Уже можно смело делать монотубы на крупные объёмы мицелия, не беспокоясь, что у тебя вырастут несколько грибочков на первой волне.
Когда я гровил с мультиспоры у меня так всё и было. Не понимаю тех, кто выращивая со взвеси стабильно снимает лес грибов, этих чернокнижников я ещё постараюсь разоблачить
Результаты с пересадки ризоморфа весьма неплохие, из 16 чашек я отобрал 8 самых лучших. Из этих 8 есть пара наилучших, с мощными участками, но есть одно но: в них поселилась бактериальная контаминация, не на всех участках, но на многих (изначально мощные ризоморфы на родительских чашках проросли на заражённых участках).
Далее планирую сделать перенос ризоморфа на T4 (6-8 чашек), а также попробовать инокулировать 1 банку зерна мощным ризоморфным
мицелием из чашки петри. А в дальнейшем, в случае успеха, попробовать размножить его методом G2G (зерно в зерно)
Примеры сильно улучшенного мицелия - очень сильные и ризоморфные гифы
Примеры сильно улучшенного урожая с ризоморфного мицелия
Гайд в скором времени будет дополняться результатами по ходу моих микологических экспериментов
Ждите обновлений!
Продолжение следует...
