Гайд. Выделение ризоморфного мицелия вида Psilocybe Cubensis на агаре

Помогаем решить проблемы, возникшие в процессе культивирования грибов
User avatar
Michael
Posts: 1
Joined: Tue Jan 25, 2022 10:16 am

Гайд. Выделение ризоморфного мицелия вида Psilocybe Cubensis на агаре

Post by Michael »

Всех приветствую!

Поставил себе цель получить ризоморфную монокультуру на агаре штамма Psilocybe Cubensis RustyWhyte и поделиться своим опытом.
Это не конечная версия публикации и гайд будет дополняться моими результатами по мере накопления опыта )

SAB (still air box)

Для старта своих микологических экспериментов я собрал SAB + приобрёл дополнительный инвентарь
Группа 2@0,5x.png


SAB использую без полотенца, но в качестве меры очистки внутреннего пространства применяю кварцевую лампу 25W с озоном, антисептик ИПС ~70% включительно
фотка 2.pn.png

Как видно на фото выше САБ стоит на раскладном столике, такой же стул рядом с ним. Набор
бюджетный, легко складывается и убирается в сторону в случае ненадобности.


Рецепт агара и его приготовление

Агар готовил по рецепту:
1️⃣ 100 мл воды
2️⃣ 2 г порошка агара пищевого
3️⃣ 2 г лёгкого солодового экстракта
Группа 4.png


❇️ Для агара подойдёт любая стеклянная банка или пластиковая тара с маркировкой 5PP
Группа 3.png

После соединения всех ингредиентов взбалтываем их в бутылке.
Далее ставим её в скороварку. Обязательно на подставке, т.к. температура кипения воды не поднимется выше 100°С, именно пар
даёт температуру в 115-120°С при автоклавировании!

Подставка как на фото ниже стоит всего 2-4$, зато благодаря этому предмету вы будете стабильно получать качественный результат.
Группа 6.png

❇️ Расстояние в 5 см от дна скороварки до края подставки используется как резервуар для воды)

Как поставили бутылку и налили воды закручиваем винт скороварки и ставим её на максимальный режим нагрева, как только засвистит пар, выходящий через клапан, сразу убавляем мощность нагрева до 40-50% и оставляем стерилизоваться на 40-60 минут.

Как только скороварка сбросит давление мы аккуратно достаём горячую бутылку с агаром.
🔴 Используем прихватку-рукавицу или полотенце, банка очень горячая!

Перетряхиваем содержимое для равномерного растворения агара. После этого несём его к САБу для охлаждения.

🔴 Очень важно дождаться пока агар остынет до такой температуры, когда мы сможем без последствий брать в руки горячую бутылку для разлива агара по чашкам, но в то же время нужно следить, чтобы агар не остыл до слишком низкой температуры, иначе он загустеет в бутылке (работать нужно быстро).

Это один из примеров разлитого агара по чашкам петри. На фото ниже - сразу после разлива агар остужается. В моём случае процесс затвердевания занял более 90 минут.
Группа 7.png


На втором фото ниже - уже затвердевший агар, на который был засеян кусочек агара с ризоморфным мицелием. В таком пластиковом коробе я отправляю его в инкубатор при t 29-30°C.
Группа 1.png


Ризоморфный мицелий и селекция

Как я сказал выше, на агаре у меня уже есть ризоморфный мицелий. Как я его получил?
На момент написания данного текста эта история практических экспериментов длится примерно месяц. Будет проще, если разделить этап каждого засева чашек петри на T - transfer (перенос), к примеру T0 - нулевой трансфер, т.е. засев агара споровым материалом.

Я использовал данную технику нанесения спорового материала:
images.png.342b2ac65c391740ef1f8c0424dd64d3.png

Из партии чашек с T0 мицелий визуально был практически полным пухом, но отобрав наиболее перспективные на вид чашки я выбрал и срезал с них участки, отдалённо похожие на ризоморфы. Перенёс их на новую партию чашек петри (это уже T1). Спустя несколько дней после прорастания мицелия мы можем оценить его и на данный момент выбрать наиболее перспективного кандидата.

Например, эта культура мне показалась самой лучшей в плане скорости роста и визуально похожей на гифы:
Группа 9.png
Группа 8.png


Данную чашку я выбрал для дальнейших пересадок. Остальные показали результаты гораздо хуже, в следствии чего они были забракованы. Как вы уже догадались, с этой чашки я также срезал наиболее красивые участки, перенеся их на новую партию агара (перенос T2). С данной партии мне удалось получить 2 чашки с визуально мощными ризоморфами:
Группа 10.png
Группа 11.png

Для более высокого шанса на закрепление стабильного результата в партии чашек T3 я взял 16 чашек с агаром, на каждую из них высадил по кусочку ризоморфного мицелия из этих двух чашек.


В планах получить ризоморфную монокультуру, как на этом фото: (фото не моё)
EaIg3wCUEAAmNH5.jpg_large.thumb.jpg.1ec6b63222d3536f09b7ecc860f9d93a — копия.jpg

После получения такой монокультуры и череды переносов для закрепления результата можно начать гров с засева зерна. После обрастания сделать ТУБ и клонировать с 1-2 волны лучших кандидатов на агар. Несколько раз сделать из этого мицелия трансфер и ризоморфный клон будет готов! Уже можно смело делать монотубы на крупные объёмы мицелия, не беспокоясь, что у тебя вырастут несколько грибочков на первой волне.

Когда я гровил с мультиспоры у меня так всё и было. Не понимаю тех, кто выращивая со взвеси стабильно снимает лес грибов, этих чернокнижников я ещё постараюсь разоблачить :lol:


Результаты с пересадки ризоморфа весьма неплохие, из 16 чашек я отобрал 8 самых лучших. Из этих 8 есть пара наилучших, с мощными участками, но есть одно но: в них поселилась бактериальная контаминация, не на всех участках, но на многих (изначально мощные ризоморфы на родительских чашках проросли на заражённых участках).

Далее планирую сделать перенос ризоморфа на T4 (6-8 чашек), а также попробовать инокулировать 1 банку зерна мощным ризоморфным
мицелием из чашки петри. А в дальнейшем, в случае успеха, попробовать размножить его методом G2G (зерно в зерно)
Группа 12.png



Примеры сильно улучшенного мицелия - очень сильные и ризоморфные гифы
yes1.JPG.4ac5e48975e57639812e8b9b4fdfc477.jpg
yes.JPG.6e25685724ff19b49778b4cc192d4bd6.jpg



Примеры сильно улучшенного урожая с ризоморфного мицелия
B_plus.thumb.jpg.52d393d880ab64d44bc6e3969bd9e92a.jpg
cameringo_20180212_172205.jpg.ef34d5a7e6dc651f8622d3c8aac18be1.thumb.jpg.ff83c5d5f55c3726ea7fdd54e47f0732.jpg
8fb255ce9159fa6e0da21a1b0b0b7471.jpg


Гайд в скором времени будет дополняться результатами по ходу моих микологических экспериментов :)
Ждите обновлений!
Продолжение следует...